Эсүүд салсан болмогц трипсиныг идэвхгүй болгохын тулд урьдчилан халаасан иж бүрэн өсөлтийн 2 боть тэжээл нэмнэ. >95% эсийн нөхөн сэргэлтийг баталгаажуулахын тулд эсийн давхаргын гадаргуу дээр хэд хэдэн удаа пипеткээр зөөлхөн тараана.
Би трипсиний үйл ажиллагааг хэрхэн зогсоох вэ?
Трипсиний боловсруулалтыг хөлдөхөөр эсвэл шоргоолж, цууны эсвэл трифтор цууны хүчил нэмснээр урвалын рН-ийг рН 4-ээс доош буулгах замаар зогсоож болно (трипсин нь цууны хүчил эсвэл трифтор цууны хүчил нэмэхэд дахин идэвхжинэ. рН нь рН 4-ээс дээш нэмэгддэг). Хоол шингэсэн дээжийг -20°C-т хадгалах боломжтой.
Трипсиныг юу саармагжуулдаг вэ?
Кальци, магнийн ион агуулсан буфер нь трипсиний үйл ажиллагааг мөн удаашруулна. Харин FBS нь трипсиний үйл ажиллагааг дарангуйлах илүү үр дүнтэй арга юм.
Ийлдэс нь трипсиныг идэвхгүй болгодог уу?
Ийлдэс нь бөөрний ферментийн задралаас үлдсэн трипсин үлдэгдэл болон эсэд нийлэгжсэн уураг задлах ферментийг идэвхгүй болгодог. Үлдэгдэл трипсинийг арилгахын тулд дахин дахин угааж байвал шинэхэн трипсинжүүлсэн эсийг ийлдэс байхгүй тохиолдолд нэг давхарга болгон өсгөж болно.
Трипсиныг идэвхгүй болгоход хэр хэмжээний медиа шаардлагатай вэ?
Та хамгийн багадаа 1:1 харьцаатай 5-10%-ийн ийлдэс агуулсан трипсинтэй тэжээлийг дарангуйлж, дараа нь центрифуг хийх шаардлагатай. болон шинэхэн тэжээлээр дунд зэргийн солилцоо.
