Та шингэсэн плазмидыг хадгалж чадах уу?

Агуулгын хүснэгт:

Та шингэсэн плазмидыг хадгалж чадах уу?
Та шингэсэн плазмидыг хадгалж чадах уу?
Anonim

Хязгаарлалтын задаргаатай бүтээгдэхүүнийг -20С-т амархан хадгалж болно. 4С-т энэ нь зүгээр байх болно, гэхдээ ямар ч идэвхжил, одны идэвхжил байхгүй эсэхийг шалгаарай. -20 хэмд байлгахыг зөвлөж байна.

Та шингэсэн ДНХ-г хэрхэн хадгалах вэ?

Гель зүсмэлийг хөргөгчинд шөнөжин, эсвэл бүр буферт хайлуулаад -20°C эсвэл -80°C-т хөлдөөж туршаад үзээрэй. ДНХ-ийн задрал нь уусдаг ДНХ-тэй ижил хурдтай, ижил нөхцөлд явагдах тул удаан хадгалахын тулд илүү хүйтэн температурыг ашиглана уу.

Пласмидыг задалдаг гэдэг нь юу гэсэн үг вэ?

Цэвэршүүлсэн плазмидын ДНХ-г 1 буюу түүнээс дээш хязгаарлалтын ферментийн (REs)-ийн тусламжтайгаар шингээж, электрофорезоор амархан шийдэгддэг тодорхой ДНХ-ийн зурвасын загварыг гаргаж авдаг. … Олон тооны клончлох сайт (MCS) дотор зүсэж, оношлоход хялбар 2-5 зурвас үүсгэдэг хязгаарлалтын ферментүүдийг ихэвчлэн сонгодог.

Та шугаман плазмидыг хэрхэн хадгалах вэ?

Хэрэв та TE-ийн доод урсгалын нөлөөний талаар санаа зовж байгаа бол ДНХ-г илүү өндөр концентрацид хадгалж, шаардлагатай үед шингэлнэ эсвэл "бага TE" буюу 10 мм Tris / хэрэглэнэ. 0.1 мм EDTA. ДНХ эсвэл РНХ цэвэр бол -20С хэмд олон сараар ямар ч муудахгүй хадгалагдах боломжтой.

Та хязгаарлалтыг хэр удаан хадгалах боломжтой вэ?

Pro-Tip Хэрэглэх хугацаа болон урвал дахь ДНХ-ийн хэмжээнээс хамааран инкубацийн хугацаа 45 минутаас нэг шөнө хүртэл байж болно. Оношлогооны хувьд 1-2 цагихэвчлэн хангалттай. Клончлоход ашигладаг >1 мкг ДНХ агуулсан задралын хувьд дор хаяж 4 цагийн турш задлахыг зөвлөж байна.

Зөвлөмж болгож буй: